誰しも「ラビット以外の抗体があればいいのに！」と思ったことがあるのではないでしょうか？ラビット抗体は、その親和性と特異性の高さから非常に評判が良いのですが、1回の免疫蛍光染色 (IF) で複数のラビット抗体を組み合わせて使用することは困難な場合があります。2 - 3種類の標的タンパク質を同時に可視化する必要がある研究で、ラビットモノクローナル抗体を用いてマルチプレックス実験を行う場合は、柔軟性を優先するために感度の低下を受け入れる必要があることもあります。時には、目的のマーカーすべてを検出するためにプロトコールを全面的に見直す必要が生じるかもしれません。
アルツハイマー病のアミロイド型モデルマウスの凍結固定脳組織を、CD68 (ネコ、緑) および TMEM119 (マウス、マゼンタ) のキメラ抗体を用いて蛍光免疫染色し、ミクログリアの活性化状態を評価しました。β-Amyloid (D54D2) XP® Rabbit mAb #8243 (赤) は、抗ラビットFc特異的二次抗体を用いて検出しました。青は、ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI #8961の染色を示しています。
しかし、異なる宿主種で作製された、すでに確実に機能することが分かっている抗体を使用できるとしたらどうでしょうか？これを実現するのが、CST®キメラ抗体です。弊社のリコンビナントキメラ抗体の製品ラインナップは、簡単に既存のワークフローに組み込むことができるため、新たな装置を用意することなく最大4プレックスのIF実験を可能にします。
モノクローナルキメラ抗体とは？
リコンビナントキメラ抗体は、親抗体 (本ブログ記事ではラビット) の一部と、マウスやウマ、ネコとなどの異なる宿主種由来の抗体の一部を組み合わせて作製される、改変されたモノクローナル抗体です。他のすべてのリコンビナントモノクローナル抗体と同様に、キメラ抗体は動物を使用せずに、in vitroでの遺伝子組換えとDNAクローニングにより作製されます。
CSTキメラ抗体は、信頼できることがすでに分かっている性能の高い抗体クローンを、新しい宿主種で再設計したものです。その結果、元のラビットクローンと同等の特異性と性能を備えた、マルチプレックスIF実験に円滑に組み込めるリコンビナントモノクローナル抗体が得られます。
つまり、キメラ抗体を用いることにより、既存のワークフローを変えることなく新しい可能性を広げることができます。
マルチプレックス実験にキメラ抗体を用いる理由
異なる動物を宿主種とする複数のモノクローナル一次抗体を用いたマルチプレックス解析は、神経科学研究における免疫蛍光染色のゴールドスタンダードです。以下で、これらの解析にキメラ抗体を使用する利点を紹介します。
既存のワークフローに簡単に組み込み可能
新しい装置やバッファー、プロトコールは必要ありません。キメラ抗体は、既存の設定やマルチプレックス手法に適合し、ハイコンテント解析にも使用できます。これらの抗体は、ラビットクローンである親抗体と同じプロトコールで実験可能なため、新たな作業を必要とすることなく実験に容易に組み込むことができます。
より多くの蛍光を利用可能
CSTキメラ抗体は、ウマ (IgG4)、ネコ (IgG1)、マウス (IgG2a) を宿主とするため、1つのサンプルでより多くの標的を検出できるようにマルチプレックスパネルを拡大できます。4種類の異なる蛍光を標識した、各宿主種に特異的な二次抗体を用いて検出できるため (下表を参照してください)、交差性を心配することなく実験を実施できます。
アルツハイマー病のアミロイドモデルマウスの凍結固定脳組織を、CD11b/ITGAM (マウス、緑) およびS100B (ネコ、赤) のキメラ抗体を用いて蛍光免疫染色し、アミロイド斑周囲のアストロサイトおよび疾患関連ミクログリアを同定しました。ラビット由来一次抗体であるHS1 (D5A9) XP® Rabbit mAb #3892 (グレー) は、抗ラビットFc特異的二次抗体で検出しました。青はProLong Gold Antifade Reagent with DAPI #8961の染色を示しています。
発現量の少ない標的の可視化
直接標識抗体は、マルチプレックス用のオプションとして有用ですが、発現レベルの低い標的では十分な強度のシグナルを示さない可能性があります。キメラ抗体は、蛍光標識二次抗体と共に用いた場合、オリジナルのCSTクローンと同等の高い親和性と低いバックグラウンドを実現し、直接蛍光標識抗体よりも優れた性能を示します。
高い費用対効果
4種類までの標的を検出するIF実験において、キメラ抗体はシンプルで費用対効果の高いソリューションになります。特別な装置や徹底的な最適化、高価なオリゴ試薬やバーコード試薬を必要とする複雑なハイプレックスシステムとは異なり、キメラ抗体はお手持ちの装置と一般的な二次抗体で検出できます。これにより、新しいトレーニングや様々な試薬、特別なイメージングプラットフォームに費用をかける必要がなくなります。さらに、キメラ抗体は簡単に購入可能であり、お求めやすい20 µLのトライアルサイズで提供されています。そのため、特定のSKUを本格的に購入する前に、予備実験に必要な分だけを購入できます。
お客様のワークフローにおけるキメラ抗体の使い方
キメラ抗体は、一般的なIFプロトコールに簡単に追加できます。
細胞または組織を固定および透過化した後、一次抗体のインキュベーションステップでラビット一次抗体と共にキメラ抗体を添加します。その後、一次抗体を洗浄し、各一次抗体の宿主種に特異的な二次抗体を追加します。二次抗体のインキュベート後、一般的なIFプロトコールに従って細胞または組織をマウントします。
1つ、忘れてはいけないことがあります。いずれのキメラ抗体も、親クローンであるラビット抗体の抗原結合領域の一部を共有しているため、交差反応を避けるために各宿主種のFc特異的二次抗体を使用する必要があります。
Fc特異的二次抗体とは何か、ご存知ですか？Fc特異的二次抗体は、一次抗体のFc領域 (Y字型の脚部) にのみ結合するように設計された二次抗体です。キメラ抗体の残りの部分 (Fab領域) は、親クローンと同じラビット由来の結合部位を保持しているため、一般的なラビット二次抗体により認識されます。これは、偽陽性シグナルが生じる原因になります。Fc特異的二次抗体を用いることにより、各宿主種由来の一次抗体のシグナルを明確に区別してイメージングし、予期しないシグナルの重複を回避できます。
下記の表では、4種類の励起波長から選択可能な、CSTキメラ抗体と組み合わせて使える二次抗体へのリンクを紹介しています。
例えば、ラビット一次抗体とネコ由来のキメラ抗体を使用する場合は、以下に紹介するようにラビット一次抗体の検出には抗ラビットFc二次抗体を、キメラ抗体の検出には抗ネコ二次抗体を使用します。これにより、各二次抗体は意図した標的のみに結合するため、偽陽性シグナルが生じる可能性を排除できます。
凍結固定マウス小脳組織をPSD95 (D27E11) Horse Chimeric mAb #19622 (グレー)、MAP2 (D5G1) XP Rabbit mAb #8707 (緑)、Synaptophysin (D8F6H) Feline Chimeric mAb #76788 (赤)、ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI #8961 (青) を用いてIFで解析しました。ラビット一次抗体であるMAP2 (D5G1) XP® Rabbit mAb #8707 は、Goat Anti-Rabbit IgG, Fc Fragment Antibody (Alexa Fluor® 647 Conjugate) #46023を用いて検出しています。
信頼できる抗体
正確な結果を取得するには、一貫性のある信頼できる抗体が必要です。そのため、CSTは、各キメラ抗体が親クローンと同等の弊社抗体に期待される高い性能を示すことを検証により確認しています。CSTキメラ抗体を、弊社が提供する高品質な二次抗体と共に使用することにより、初回および毎回、一貫性と再現性の高い結果を取得できます。
2025年10月の時点で販売されている製品は、新鮮な凍結組織を用いた免疫蛍光染色で検証されています。現在、これらの抗体は通常、グリセロールベースの組成で提供されています。キャリアフリー組成やBSAフリー組成、カスタム濃度、大量注文にも対応しています。
より詳細で堅牢な結果を取得するために、不慣れなプロトコールや新しい装置に苦労する必要はありません。CSTキメラ抗体を用いることにより、馴染みのある効率的なマルチプレックス解析実験を実施できるため、科学に集中することができます。
その他のリソース
- ブログ：マルチプレックスIF実験を成功に導く標識抗体を用いた戦略
- ブログ： 複数の抗体を用いた蛍光染色：2つの一般的な手法
- リソースセンター：マルチプレックス解析と空間生物学
本ブログ記事の執筆は、CSTマーケティングコンテンツマネージャーのAlexandra Foleyにご協力いただきました。25-NDG-41450
