マウス組織サンプルでは、ウェスタンブロットのローディングコントロールタンパク質のすべてが同等に発現するとは限りません。例えば、マウスの心臓のβ-actinや、マウスの小腸のGAPDHは比較的少なくなっています。しかも、特定の実験条件下では、一部のローディングコントロールのタンパク質量が影響を受けて変化します。例えば、β-actinのmRNAの量は、一部の組織においてインスリン治療により変化します。
したがって、サンプルの種類と実験に最適なローディングコントロールがどれであるかを、前もって調べて決定しておくことが重要です。このブログでは、様々なマウス組織における、一般的なローディングコントロールタンパク質の発現レベルをウェスタンブロットの例を用いてご紹介していますので、最後までご覧ください。
ウェスタンブロット用のマウス組織のローディングコントロールの選定
Cell Signaling Technology (CST) の科学者は、ウェスタンブロットでマウス組織を試験する際に、どのように準備をするのでしょうか？弊社は、ウェスタンブロットを行う前に、信頼性の高い発現データーベースと論文で、その組織タイプがローディングコントロールタンパク質を発現しているかどうかを確認しています。また、おおよその発現量を予測するために、そのタンパク質の相対的な存在量も確認しています。組織が標的のmRNAを発現するからといって、結果として生じるタンパク質の量がウェスタンブロットで検出できるほど高いとは限りません。ブロットを行う前に、使用予定のローディングコントロールタンパク質が組織サンプル内に高度に発現されることを確認しておきましょう。そうすることにより、貴重な時間と試薬を節約できます。
関連リソース：ウェスタンブロットのトラブルシューティングガイド
CSTは、ローディングコントロールを選択するためのサポートの一環として、一般的なローディングコントロール抗体とマウス組織タイプのいくつかを用いた社内試験を実施しました。結果は、以下の表をご覧ください。
様々なマウス組織における、ローディングコントロールの発現
| 脳 | 脾臓 | 腎臓 | 膵臓 | 精巣 | 皮膚 | 目 | 心臓 | 肺 | 骨格筋 | |
| α-Tubulin | ✔ | ✔ | ✔ | 低 | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ |
| β-Actin | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | 低 | ✔ | ✔ |
| β-Tubulin | ✔ | ✔ | ✔ | 低 | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ |
| Cox IV | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ |
| GAPDH | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ |
| Histone H3 | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | ✔ | 低 | 低 | ✔ | ✔ | ✔ |
| β3-Tubulin | ✔ | 低 | 低 | 低 | ✔ | 低 | ✔ | 低 | ✔ | ✔ |
Table: 様々なマウス組織における一般的なローディングコントロール抗体の発現レベル
また、以下に各マウス組織における一般的なローディングコントロールタンパク質の発現レベルを確認した際の、ウェスタンブロットの例を示しています。ウェスタンブロット用に検証されたCSTのローディングコントロール抗体のリストと、マウスの各標的タンパク質を認識する抗体の簡単なリストもご覧いただけます。
最新の製品に関する情報については、CST製品カタログをご覧ください。また、購入に関するご質問があれば、お気軽にお問い合わせください。
各マウス組織における、α-Tubulinローディングコントロールの発現
様々なマウス組織の抽出物をα-Tubulin (11H10) Rabbit mAB #2125を用いてWBで解析しました。
マウスに交差性がある、CSTのウェスタンブロット用のα-Tubulin抗体：
各マウス組織における、β-Actinローディングコントロールの発現
注意：β-Actinは、Caspase-3によりAsp244とGly245の間が切断され、32 kDaの断片と15 kDaの断片が生じます。いくつかのβ-Actin抗体では、抗原の位置により、完全長のβ-Actinと、β-Actinの一部分である32kDa断片の両方を検出する場合があります。
様々なマウス組織の抽出物をβ-Actin (D6A8) Rabbit mAB #8457を用いてWBで解析しました。
マウスに交差性がある、CSTのウェスタンブロット用のβ-actin抗体：
- β-Actin (8H10D10) Mouse mAb #3700
- β-Actin Antibody #4967
- β-Actin (13E5) Rabbit mAb #4970
- β-Actin (D6A8) Rabbit mAb #8457
- β-Actin (E4D9Z) Mouse mAb #58169
各マウス組織における、β-Tubulinローディングコントロールの発現
様々なマウス組織の抽出物をβ-tubulin (9F3) Rabbit mAb #2128を用いてWBで解析しました。
マウスに交差性がある、CSTのウェスタンブロット用のβ-Tubulin抗体：
- β-Tubulin (9F3) Rabbit mAb #2128
- β-Tubulin Antibody #2146
- β-Tubulin (D2N5G) Rabbit mAb #15115
- β-Tubulin (D3U1W) Mouse mAb #86298
各マウス組織における、COX IVローディングコントロールの発現
様々なマウス組織の抽出物をCOX IV Antibody #4844を用いてWBで解析しました。
マウスに交差性がある、CSTのウェスタンブロット用のCOX IV抗体：
- COX IV Antibody #4844
- COX IV (4D11-B3-E8) Mouse mAb #11967
- COX IV (D6I4K) Rabbit mAb (Rodent Specific) #38563
各マウス組織における、GAPDH ローディングコントロールの発現
様々なマウス組織の抽出物をGAPDH (D16H11) XP Rabbit mAB #5174を用いてWBで解析しました。
マウスに交差性がある、CSTのウェスタンブロット用のGAPDH抗体：
各マウス組織における、Histone H3ローディングコントロールの発現
様々なマウス組織の抽出物をHistone H3 (D1H2) XP Rabbit mAB #4499を用いてWBで解析しました。
マウスに交差性がある、CSTのウェスタンブロット用のHistone H3抗体：
- Histone H3 (96C10) Mouse mAb #3638
- Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb #4499
- Histone H3 Antibody #9715
- Histone H3 (3H1) Rabbit mAb #9717
- Histone H3 (1B1B2) Mouse mAb #14269
各マウス組織における、β3-Tubulinローディングコントロールの発現
様々なマウス組織の抽出物をβ3-tubulin (D65A4) XP Rabbit mAB #5666を用いてWBで解析しました。
マウスに交差性がある、CSTのウェスタンブロット用のβ3-Tubulin抗体：
- β3-Tubulin (TU-20) Mouse mAb #4466
- β3-Tubulin (D71G9) XP® Rabbit mAb #5568
- β3-Tubulin (D65A4) XP® Rabbit mAb #5666
まだ、実験に対してどれが最適な抗体か迷っていますか？抗体の選択または実験の設定方法に関する質問は、CSTテクニカルサポートまでお気軽にお問合せください。お客様の実験に最適な抗体の選択を、是非お手伝いさせてください！
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