研究の総括：様々な論文で使用されるCST^®抗CARリンカー抗体

EphA3-Targeted CAR T Cells in Glioma & Generate Curative Memory T Cell Responses

Lertsumitkul et al. (JITC 2024) | DOI: 10.1136/jitc-2024-009486

この論文では、著者らが膠芽腫やびまん性正中線神経膠腫などの悪性度の高い神経膠腫における標的として同定したEphA3 (Ephrin type-A receptor 3) に対する、第2世代CAR-T細胞療法の評価について詳述されています。腫瘍を特異的に標的化し血液脳関門を突破できる、EphA3を標的とするCAR-T細胞療法は、in vitroおよびin vivoにおいて優れた有効性を示しており、マウスモデルでは腫瘍を消失させることに成功しました。また、この研究では、EphA3を標的とするCAR-T細胞が長期的な免疫記憶を生み出し、腫瘍の再移植実験の際に、再び腫瘍を消失させることが分かりました。

使用事例：

定量： T細胞への遺伝子導入効率を測定するために、G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAbクローンを用いて、EphA3を標的とするCAR-T細胞の存在と増殖を確認しています。

Synthetic Immune Checkpoint Engagers Protect HLA-deficient iPSCs and Derivatives from Innate Immune Cell Cytotoxicity

Gravina et al. (Cell Press 2023) | DOI: 10.1016/j.stem.2023.10.003

この論文では、免疫細胞の免疫チェックポイントタンパク質の活性化と細胞毒性の抑制を可能にする、細胞表面に発現する新しいクラスの合成分子 (エンゲージャー) を設計および試験しています。特に、著者らは、免疫チェックポイントであるSIRPa、TIM3、LILRB1を標的とし、NK細胞やマクロファージによる細胞障害を抑制するエンゲージャーを設計して試験しています。このアプローチでは、同種がん免疫または再生細胞治療薬に対する拒絶反応を抑制し、その有効性を向上させることを目的としています。

使用事例：

検出： G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (Alexa Fluor^® 647 Conjugate) #69782を用いて、フローサイトメトリーで細胞表面に発現するエンゲージャーの検出と定量を行い、標的分子と結合する前後の、合成エンゲージャーの発現ダイナミクスを調べています。 

検出： ビオチン標識抗G4SリンカーF(ab’)₂フラグメントを用いて、フローサイトメトリーで、合成導入遺伝子 (SIRPa-EとCD64t) を発現するB2MノックアウトiPSCの免疫回避能力の変化を評価しています。

Evaluation of Anti-CAR Linker mAbs for CAR T Monitoring after BiTEs/bsAbs and CAR T-Cell Pretreatment

Grahnert et al. (Biomedicines 2024) | DOI: 10.3390/biomedicines12081641

この論文では、抗CARリンカー抗体を用いて、二重特異性抗体 (bsAb) または二重特異性T細胞エンゲージャー (BiTE) のいずれかの治療を行った患者におけるCAR-T細胞療法の効果をモニタリングしています。従来の抗体ベースのCAR検出法では、CAR-T細胞とbsAb/BiTEが同じ抗原を標的とする場合に、偽陽性となる可能性があります。著者らは、現在臨床使用が承認されているBCMAおよびCD19を標的とするすべてのCAR-T細胞製品を含む検体を解析して、抗CARリンカー抗体が、BiTEまたはbsAbのいずれの処理にも影響されない特異性の高い検出法であることを実証しています。しかし、その感度は、臨床的に利用可能なCAR-T細胞療法ごとに異なります。

使用事例： 

検出： CSTが提供する抗CARリンカー抗体は、IdecelやTisa-cel、Axi-cel、Brexu-cel、Liso-celで処理した血液サンプル中のCAR-T細胞の検出において、高い感度と特異性を示しました。そのため、この手法は、抗原ベースの検出法を用いる際に免疫細胞エンゲージャーを同時検出することで生じるバックグラウンド染色とCAR-T細胞の染色を区別できる、信頼性の高い方法となります。しかし、G4S CARリンカーを含むCilta-celは、抗CARリンカー抗体では検出できませんでした。

CD8α Structural Domains Enhance GUCY2C CAR-T Cell Efficacy

Baybutt et al. (Cancer Biology & Therapy 2024) | DOI: 10.1080/15384047.2024.2398801

この研究では、固形がんの免疫療法において、異なるCARコンストラクトがその効果にどのような影響を与えるかを調べるために、CAR改変細胞のヒンジドメインおよび膜貫通ドメインに関する試験を行っています。特に、著者らは、大腸がんに用いるGUCY2Cを標的とするCARデザインにおける、CD8ɑまたはCD28に由来するヒンジドメインおよび膜貫通ドメインを比較しています。その結果、各構造ドメインはCARの発現や分化、疲弊の表現型といった抗原に依存しない事象の違いには寄与しないものの、CD8ɑの構造ドメインを持つCARは、標的に対してより高い親和性を示すことが分かりました。

使用事例：

検出：G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (PE Conjugate) #38907を用いて、フローサイトメトリーで細胞表面のVARを検出および定量しています。また、検出にはProtein Lも使用しており、リンカー抗体と同等の結果が得られたことが示されています。

検出：G4S Linker (E7O2V) Rabbit mAb (Alexa Fluor^® 488 Conjugate) #50515を用いた以下の異なる2種類のフローサイトメトリー実験で、CAR陽性T細胞の標識および同定を行っています：

• 透過化した細胞を用いた細胞内フローサイトメトリー実験によるサイトカイン産生の測定
  
• 細胞表面マーカーを用いたT細胞の表現型解析による免疫記憶状態の決定と疲弊マーカーの検出