研究室の費用を考えることは、好きなシグナル伝達経路を研究するほど楽しいことではありません。しかし、研究資金を入手するのは困難なため、ウェスタンブロッティング用の試薬を選ぶ際には考えなくてはなりません。実験の成功は、抗体の信頼性や特異性、感度に左右されるため、一次抗体の質を心に留めておくことは理にかなっています。期待通りに抗体が機能しない場合は、実験が失敗することがあり…失敗したウェスタンブロットの費用は、想像以上となることもあります。
抗体価格、抗体検証の程度、サポートデータの質はベンダー間で大きく異なります。大企業は多くの場合、幅広い製品提供を誇っていますが、これらに由来する抗体の信頼性、特異性、感度は期待を満たさない可能性があります。対照的に、社内で独自の一次抗体を作製・検証し、わざわざお客様とデータを共有する企業の抗体を選ぶことができます。特徴付けの不適切な抗体は、特異性を欠くために偽陽性の結果につながるか、感度が十分でないために偽陰性の結果につながることがあります。さらに悪いことに、適切なコントロールがない場合、抗体が機能しないことが明らかにならない可能性があり、誤った結果に基づいてプロジェクトを継続することになります。
サンプル調製からブロットの実行まで、ウェスタンブロットには時間がかかり、費用がかさむ可能性があります。サンプル調製の費用は、特に組織サンプルや初代培養細胞を使用する場合は増加します。例えば、実験動物からサンプルを調製する場合、飼育などの費用が含まれます。実際の実験に要する時間に加えて、動物が成熟するには数週間かかることがあります。これは、サンプル採取に結局数千ドルの費用がかかり、数週間あるいは数ヶ月が必要になる可能性があることを意味します。結局こうしたすべての努力にもかかわらず、不適切に検証された抗体が原因で実験が失敗すれば、それは悲劇です。
ウェスタンブロットが失敗すると、最初からやり直し、大規模なトラブルシューティングの実行を強いられることになります。これは、例えば抗体を滴定するなど実験条件を最適化するのに時間とお金を費やさなければならなくなり、このため他の実験に費やす時間が少なくなることを意味します。一方で、貴重な助成金が消えてゆきます。このような理由から、初回ならびに毎回機能すると信頼できる抗体を使用することが重要なのです。これを確実にするためには、抗体を完全に検証し、最適な希釈条件を知るべきです。失敗のリスクを減らすために、次の要件に準拠していることを確認しながら、お客様ご自身で抗体を検証することができます：
- コントロール細胞/組織を使用して予想される分子量の位置にきれいなバンドが認められる
- 次の一つ以上の項目により確認される特異性：
- 活性化剤または阻害剤による処理
- 陽性および陰性細胞株または組織
- リン酸特異的抗体のためのホスファターゼ処理
- siRNAまたは他の手段を用いたノックダウン、あるいはマウスモデルを用いたノックアウト
- 滴定によって決定された最適希釈条件
これには複数のウェスタンブロットを実行する必要があり、追加試薬の購入が必要になり、さらに費用がかさむ場合があります。または、上記の基準を満たし、高品質のデータをお客様と共有するサプライヤーから抗体を購入することができます。これらの実績のある抗体は、ウェスタンブロットで成功するチャンスを最大限に増やしてくれます。最終的にこのことは、出版用に信頼性の高いデータを取得し、低コストでプロジェクトをより早く進めるのに役立ちます。
特徴付けが不十分な抗体を購入すると、結局最後に多くの費用がかかることになります。次回の実験に費やす場合には、時間と資金を無駄にしないでください。十分に検証された信頼できる抗体を購入してください。
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