細胞状態のモニタリングツール

細胞状態や細胞応答のモニタリングに関するお悩みはありませんか？基礎研究の観点から見ると、シグナル伝達経路は非常に複雑に絡み合っており、例えば特定のタンパク質が修飾される場合やエピジェネティックなイベントが起こる場合、結果を完全に理解するためには細胞指標が必要になります。

今日の論文採択事情を鑑みると、ある刺激にさらされた場合にタンパク質のリン酸化が起こることを明らかにするだけでは不十分で、そのリン酸化イベントが細胞集団の挙動に与える影響も明らかにする必要があります。医学的橋渡し研究の観点から見ると、見込みのある治療法に対して細胞集団がどのような応答をするかを明らかにすることが非常に重要です。このような例として、神経変性疾患におけるアポトーシスの測定、腫瘍疾患における細胞老化の測定、ウイルス感染における免疫応答の測定のほか、様々なものが挙げられます。

細胞状態と細胞応答をモニタリングする主要なマーカー

細胞状態は、調べたいプロセスに関連する主要なマーカーや指標を測定することでモニタリングできます。特定のプロセスの場合、異なる方法によって複数の指標が得られることもあります。このため、主要なマーカーを複数測定することで偽陽性を防ぐことができ、また、実験に最適なマーカーやアプリケーション、検出方法を柔軟に選択することができます。

例えばアポトーシスのモニタリングには、細胞死の様々な特性やシグナル伝達経路を標的とする複数の方法があります。TUNEL (Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling) は、アポトーシス後期にみられる断片化されたDNAを検出する染色法です。これはフローサイトメトリーや免疫組織化学染色、蛍光顕微鏡を用いたアポトーシス細胞の検出に広く利用されています。また、フローサイトメトリーではホスファチジルセリン (PS: Phosphatidylserine) に結合するAnnexin Vもよく利用されます。この方法では、細胞膜の内側に存在するPSがアポトーシス初期に外側に現れることを利用し、アポトーシスの初期段階をモニタリングします。さらに、Caspase-3の活性化を利用して、ウェスタンブロットや免疫組織化学染色、蛍光顕微鏡でカスパーゼによるアポトーシスをモニタリングすることもできます。

細胞老化のモニタリング

細胞老化も複数の方法でモニタリングすることができます。一般的なアプローチの1つとして、細胞老化の特性であるβ-ガラクトシダーゼの増加を測定するアッセイがあります。フローサイトメトリーやプレートベースのアッセイによる蛍光の検出や、染色キットによるイメージングで、酵素活性を測定することができます。

また、ウェスタンブロッティングや免疫沈降、免疫組織化学染色、免疫蛍光染色、フローサイトメトリーといった方法でp16 INK4A、p21 Waf1/Cip1、Lamin B1などの細胞老化のマーカーの発現を検出することで、細胞老化をモニタリングすることもできます。

細胞状態をモニタリング用のアッセイキットと抗体

Cell Signaling Technologyは、研究を始める場合に役立つ、様々な細胞アッセイキットや主要なマーカーを標的とするAntibody Samplerキットをご用意しています。

細胞増殖

• BrdU Cell Proliferation Assay Kit #6813

• BrdU Proliferation Chemiluminescent Assay Kit #5492

• Cell Proliferation Tracer Kit (Fluorometric, Blue 520) #53452

•  Cell Proliferation Tracer Kit (Fluorometric, Violet 450) #48444

• Microglia Proliferation Module Antibody Sampler Kit #49938

増殖とアポトーシス

• SignalStain^® Proliferation/Apoptosis IHC Sampler Kit #8109

細胞生存率

• XTT Cell Viability Kit #9095

• Resazurin Cell Viability Kit #11884

• Tau Mouse Model Neuronal Viability IF Antibody Sampler Kit #56511

• β-Amyloid Mouse Model Neuronal Viability IF Antibody Sampler Kit #41608

酸化状態

• Cellular Glutathione Detection Assay Kit #13859

• Griess Reagent Nitrite Measurement Kit #13547

細胞毒性

• LDH Cytotoxicity Assay Kit #37291

• 7-AAD/CFSE Cell-Mediated Cytotoxicity Assay Kit #72782

アポトーシス

• SignalStain® Apoptosis (Cleaved Caspase-3) Detection Kit #12692

• Caspase-3 Activity Assay Kit #5723

• Annexin V-FITC Early Apoptosis Detection Kit #6592

• Annexin V-PE Early Apoptosis Detection Kit #40295

• Apoptosis/Necroptosis Antibody Sampler Kit #92570

• Apoptosis Antibody Sampler Kit #9915

• Apoptosis Antibody Sampler Kit (Mouse Preferred) #9930

• Pro-Apoptosis Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit #9942

• Pro-Apoptosis Bcl-2 Family Antibody Sampler Kit II #98322

• Stress and Apoptosis Antibody Sampler Kit #8357

細胞老化 

• Senescence β-Galactosidase Activity Assay Kit (Fluorescence, Flow Cytometry) #35302

• Senescence β-Galactosidase Activity Assay Kit (Fluorescence, Plate-Based) #23833

• Senescence β-Galactosidase Staining Kit #9860

• Senescence Marker Antibody Sampler Kit #56062

• Senescence Associated Secretory Phenotype (SASP) Antibody Sampler Kit #38461

• Mouse Reactive Senescence Associated Secretory Phenotype (SASP) Antibody  Sampler Kit #85741